【原创】生物类似药相似性分析(三):以GP2013(利妥昔单抗)为例

生物制药小编Armstrong2018-04-29 00:43:38

本文为相似性分析系列第3篇文章,前2期可参见:

  1. 生物类似药相似性分析:ZarxioRemsima为例(一

  2. 生物类似药相似性分析:ZarxioRemsima为例(二


2016524日,三星Bioepis宣布:SB2(英夫利昔单抗,Remicade生物类似药)的BLA上市申请获得FDA受理。如果获批,根据协议将由默沙东负责美国地区的销售。上市申请基于一期、三期临床的可比性数据,关键三期临床包括584RA患者,临床有效性与安全性数据均具可比性。


同一天,山德士宣布GP2013(利妥昔单抗,Rituxan/MabThera生物类似药)的上市申请获的EMA受理。


两个biosimilar中,GP2013的理化、体外功能相似性研究数据经山德士披露,本文梳理相关数据供读者参考。


一、GP2013Remicade相似性分析方案

GP2013与参照药MabThera一样,都采用CHO细胞系表达。山德士对两者理化、体外活性相似性采用多种方法进行了深入研究。



二、GP2013Remicade相似性分析结果

工艺相关杂质没有座位可比性研究的一部分,因为不同的工艺必然有不同的工艺相关杂质谱,但所有恭喜相关杂质的残留均符合相关法规和指导原则的要求。当对比MabtheraRituxan时,发现两者无分析层面的差异性。但是发现了一个时间上迁移(shift)点:参照药在该时间点前后一些质量属性,如CEX图谱和profile发生了一定改变,猜测是由于生产工艺发生了变更。MabTheraRituxan都发生了这种迁移变化。且相互之间在迁移前后均无分析层面差异,显示两种产品为来自相同原液。


2.1 一级结构:

LC-UV/MS肽图100%覆盖,LC-MS/MS结果显示一级结构一致。



2.2 高级结构:

所有10对二硫键均确认,两者一致。自由巯基分析结果具有可比性:均为03.mol/molCDFTIR图谱均重合无可见差异。

氢氘交换显示两者在肽段水平上存在轻微差异,这主要是由于该检测方法受样品微环境影响很大。




NMR无法获得大分子抗体的结构确证信息,但可以提供表征分析,结果显示两者图谱高度相似。


为了进一步获得更加明确的高级结构信息,利用X-Ray得到了分辨率为2.02埃的GP2013结构和1.85埃的MabThera结构。平均误差只有0.12埃,显示两者的高级结构可认为是完全相同的。


2.3 电荷异构体和氨基酸修饰:

电荷异构体CEX分析显示,GP2013的总碱性异构体含量在参照药范围内,但总酸性异构体含量稍低于参照药。进一步分析GP2013L28H肽段脱酰胺产物位0.5%,参照药这一数值为1%。脱酰胺反应在保存期间会增加,因此,更低的脱酰胺产物含量是可接受的。两者Met256氧化产物含量具有可比性。


GP2013脯氨酸酰胺化产物低于2%,参照药则未检测到。根据文献,脯氨酸酰胺化APFab亲和力及Fc效应功能均无影响。为进一步确证,制备了9% APGP2013样品,动物体内试验证实与参照药相比,AUCCmax都具有可比性,从而证实AP含量为非关键质量参数。


两者糖化产物都在2-3%范围内,具有可比性。




2.4 糖基化:

两者Asn301糖基化比例都在99%以上,主要糖型bG0bG1bG2含量具有可比性(见下图A),部分具有轻微差异(见下图B)。


对于非主要糖型,GP2013的一致性低于参照药。GP2013的甘露糖(Man5M7M8,M9)为1%,略低于参照药的1.7%。去岩藻糖基化对ADCC活性有影响,尤其是bG0GP2013的去岩藻糖基化bG0含量为1.4%,落在参照药0.3-1.8%的中间。


总体来说,两者糖基化仅在非主要糖型存在细微差异,可以下结论:两者糖基化profile具有可比性。


2.5 分子大小异构体:

CE-SDS分析两者纯度在98%以上,HHL含量均在1.5%左右。SEC显示GP2013的纯度为大于99%,参照药大于98%。用更灵敏的AF4方法分析,两者具有可比性。


可见异物方面,GP2013≥10um颗粒数小于200/支,≥25um颗粒数小于5/支,与参照药一致。两者都无可见颗粒。


总体来说,两者纯度相似,聚集体和颗粒水平都具有可比性。



2.6 受体亲和力分析:

SPR分析显示FcγRFcRn受体亲和力均具有可比性。


2.7 生物活性

细胞学检测显示两者的CD20亲和力、ADCC活性、CDC活性、细胞凋亡诱导能力均具有可比性。



三、总结

GP2013采用与参照药相同的CHO细胞系,尽管不清楚参照药的生产工艺,仍获得了与参照药高度相似的生物类似药产品。通过非临床研究与临床研究,两者的有效性与安全性均具有可比性,满足欧美的生物类似药申报要求,有望成为第一个登陆欧美市场的Rituxan类似药。

 

四、山德士与三星Bioepis生物类似药pipeline

 

三星Bioepis第一波生物类似药:


山德士后期研发阶段生物类似药pipeline:



参考资料:

  1. Physicochemicaland Functional Comparability Between the Proposed Biosimilar Rituximab GP2013and Originator Rituximab

  2. http://www.samsungbioepis.com/

  3. https://www.novartis.com


作者:ArmStrong

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